Медицина

Методические указания

Методические указания

к практическим занятиям для студентов стоматологического факультета.

ЗАНЯТИЕ № 12 (практическое - 6 час.)

Темы:

1. Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

2. Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

Цель: Уметь определять содержание билирубина в сыворотке крови и применять знание об обмене хромопротеинов для объяснения механизма возникновения желтух Уметь выполнять тимолову пробу и качественную реакцию на индикан и использовать полученные результаты для оценки функционального состояния печени.

Уметь исследовать физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека, объяснить механизм образования мочи, определять патологические компоненты мочи и использовать полученные данные для диагностики болезней почек и нарушения обмена веществ в организме.

Профессиональная ориентация студентов: Печень является главным органом обезвреживания токсических веществ, в частности продуктов гниения белков (индола, скатола и др.), потому определение содержания индикана в моче является важным признаком детоксикационной функции печени и усиления гнилостных процессов в кишечнике. Билирубин относится к желчным пигментам, является токсичным веществом, обезвреживается в клетках печени. Нагромождение билирубина в крови выше 35 мкмоль/л приводит к откладыванию его в тканях, появлению желтухи. Потому определение содержания билирубина в сыворотке крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики желтух.

Данные анализа мочи, соединенные с клиническими наблюдениями, помогают установить характер хода патологического процесса и имеют диагностическое значение. Клинический анализ мочи является обязательной составной частью общего обследования больного. При патологических состояниях, которые связаны с расстройством обмена веществ и нарушениям деятельности тех или других органов (почек, печени, сердца, пищеварительных органов), происходит изменение состава крови, что неминуемо влияет на состав мочи.

Методика выполнения практической работы: - 9.00-12.00 час.

Выполнение практической работы происходит согласно с “Методическими указаниями для студентов” с обязательным выводом в конце каждой работы.

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

Работа 1. Провести определение общего билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин образует с диазореактивом соединение (азобилирубин) розового цвета. Интенсивность цвета пропорциональна концентрации билирубина и определяется колориметрически. Свободный (непрямой) билирубин нерастворимый, поэтому его предварительно переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива.

Ход работы

К 0,5 мл сыворотки крови добавляют 0, 25 мл смеси диазореактива ( 10 мл диазореактива № 1 смешивают с 0, 3 мл диазореактива № 2) и 1, 75 мл кофеинового реактива. Перемешивают и оставляют пробирку на 10 мин., после чего колориметрируют на ФЭКе при зелёном светофильтре в кювете 5 мм против воды. Стандартный раствор билирубина (10 мкмоль/л) колориметрируют при этих же условиях. Он приготовлен в лаборатории кафедры.

Расчёт по формуле:

С_ст´Э_оп

Х= -------------, где:

Э_оп

Х – концентрация билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);

Э_оп и Э_ст – экстинкции опытной и стандартной проб.

Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме концентрация общего билирубина в крови составляет 1, 7 – 20, 5 мкмоль/л. Увеличение в крови билирубина выше 35 мкмоль/л приводит к отложению его в тканях, появление желтухи. Однако для диагностики и дифференциации желтух необходимо определение соотношения свободного (непрямого) и связанного (прямого) билирубина. В норме их содержание соответственно составляет 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л и 0, 86 – 4, 3 мкмоль/л.

Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).

Принцип метода. При действии концентрированной НСl индикан гидролизует с образованием индола, который окисляется с помощью FeCl₃ в индоксил и синее индиго.

Ход работы

К 4 мл мочи добавляют 0, 4 мл раствора ацетата свинца (CH₃COOPb) для осаждения жёлчных пигментов, солей и др. веществ. Фильтруют, затем 1 -2 мл фильтрата смешивают с равным объёмом реактива Обермейера (раствор FeCl₃ в концентрированной НСl), добавляют 0, 5 – 1 мл хлороформа и осторожно перемешивают. Наблюдают несколько минут. Если нижний хлороформный слой окрашивается в синий или красноватый цвет, реакция считается положительной. В норме реакция отрицательная.

Положительная реакция свидетельствует об усилении процессов гниения белков в организме, но обезвреживающая функция печени не нарушена.

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Принцип метода. Проба основана на определении степени помутнения смеси сыворотки крови с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере, что обусловлено его взаимодействием с крупнодисперсными белками сыворотки – гамма-глобулинами и липопротеинами низкой плотности. Проба становится положительной при уменьшении содержания альбумина и увеличением бета- и гамма-глобулинов.

Ход работы

В пробирку вносят 4, 8 мл тимолового реактива, добавляют 0,08 мл сыворотки крови, перемешивают, выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Фотометрируют против тимолового реактива при длине волны 630-690 нм. Степень помутнения находят по калибровочному графику. Калибровочный график приготовлен в лаборатории кафедры. В норме тимоловая проба соответствует 0 – 5 ед. помутнения.

Повышение показателей (положительная проба, больше 5 ед.) отмечается при гепатитах, эндокардите. При механической желтухе, ревматизме проба отрицательная.

ІІ Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

Работа 4. Определить физико-химические свойства мочи.

а) Определение рН мочи.

Реакцию мочи определяют с помощью индикаторов – синей и красной лакмусовой бумаги. Наносят каплю мочи на лакмусовые бумажки. При нейтральной реакции индикаторы не меняют цвет, при кислой реакции синяя лакмусовая бумажка краснеет, при щелочной – красная бумажка синеет.

б) Определение удельного веса мочи.

Для определения удельного веса мочи используются урометры. Они бывают двух видов – для мочи с низким и нормальным удельным весом с делениями от 1,000 до 1,030, и для мочи с высоким удельным весом с делениями от 1,020 до 1,060.

Ход работы

Мочу наливают в стеклянный цилиндр (по стенке, медленно, чтобы не образовывалась пена). Определение начинают с урометра первого типа. Его опкускают в мочу медленно. Когда урометр перестает опускаться, его нужно слегка толкнуть сверху, после чего он, сделав несколько движений вверх-вниз, остановится. По нижнему мениску шкалы урометра определяют удельную плотность мочи. Если урометр первого вида выталкивается мочой и он не опускается до шкалы, значит, удельная плотность мочи высокая и для определения используют урометр второго вида. Исследования надо проводить при температуре 15 ⁰С. Если температура выше, то на каждые +3º добавляют 0,001 к показателям шкалы и если ниже на 3º – отнимают .

В норме удельная плотность мочи при температуре 15 ⁰С составляет 1.015-1.025, но в отдельных порциях в течение суток эти колебания значительно шире.

в) Определение цвета, запаха, прозрачности мочи проводят органолептическим способом.

Работа 5. Определить общий азот мочи.

Принцип метода. От азотсодержащих веществ мочи при нагревании в присутствии концентрированной H₂SO₄ (минерализация) отщепляется аммиак, который превращается в сульфат аммония (NH₄)₂SO₄. Последний определяется с помощью|посредством| реактива Несслера (образуется соединение оранжевого цвета). Интенсивность цвета прямо зависит от концентрации аммиака и определяется колориметрически.

Ход работы

Минерализат мочи получают в лабораиории. Для определения общего азота в одну пробирку вносят 0,5 мл минерализата, во вторую – 0,5 мл стандартного раствора (NH₄)₂SO₄. В обе пробирки добавляют по 6,5 мл воды и по 0,5 мл реактива Несслера. Растворы хорошо перемешивают и определяют оптическую плотность на ФЭКе при зеленом светофильтре в кювете 3 мм против воды.

Расчет проводят по формуле :

Эоп × Сст

Соп = --------------- × 1,5, где:

Эст

Эоп и Эст – экстинкции опыта и стандарта;

Сст – концентрация стандарта (г/л) указана на флаконе с реактивом;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи;

Соп – концентрация общего азота мочи (г/сутки).

Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме содержание общего азота мочи составляет 10-18 г/сутки (или 428,4-1213 ммоль/сутки).

Работа 6. Работа 3. Качественные реакции на белок в моче и определение его количества.

Принцип метода. Для определения белка используют реакции осаждения при помощи азотной или сульфосалициловой кислоты (последняя более чувствительна, осаждает и пептиды).

Ход работы

Реакция Геллера.

В пробирку вносят 10 капель концентрированной азотной кислоты. Слегка наклонив пробирку, по стенке вливают 10 капель мочи. В присутствии белка на границе жидкостей образуется осадок в виде кольца помутнения. Такую же реакцию можно проделать с сульфосалициловой кислотой. Для сравнения реакции проводят с мочой здорового человека.

Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

Принцип метода. Используя реакцию Геллера и тот экспериментально установленный факт, что образование кольца помутнения между 2 и 3 мин соответствуют концентрации белка 0,033 г/л, определяют содержание белка в моче путем её разведения.

Ход работы

В 5 пробирок вносят по 1 мл дистиллированной воды. В первую добавляют 1 мл мочи, в которой обнаружен белок. Содержимое пробирки перемешивают и 1 мл раствора переносят во вторую пробирку, после перемешивания 1 мл переносят в третью и так до последней, из последней пробирки 1 мл смеси выливают. Следовательно, в каждой из 5 пробирок остается по 1 мл мочи, разведенной последовательно в 2, 4, 8, 16, 32 раза. В 5 других пробирок вносят по 1 мл концентрированной HNO₃. Разведенную мочу наслаивают, начиная из последней пробирки, на азотную кислоту. По истечении 3-х минут отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, где еще заметно кольцо помутнения.

Расчет:

Если кольцо еще заметно в пробирке с разведением 8, то содержание белка составляет:

0,033 г/л × 8 = 0,246 г/л (или ‰).

Оценить результат и указать возможные причины протеинурии.

Работа 7. Качественная реакция на кровь (бензидиновая проба).

Принцип метода. При наличии крови в моче пероксидаза, используя как акцептор електронов Н₂О₂, окисляет бензидин с образованием окрашенных продуктов реакции.

Ход работы

К 5 каплям 1 % бензидина добавляют 5 капель 3 % Н₂О₂ и 5 капель исследуемой мочи.При наличии крови наблюдается появление синего цвета (окисленный бензидин).

Отметить возможные причины гематурии.

Работа 8. Качественное и количественное определение глюкозы в моче.

а) Реакция Фелинга.

Принцип метода основан на восстанавливающих свойствах глюкозы за счёт окисления альдегидной группы (восстанавливается гидроксид меди до оксида меди).

Ход работы

К 1 мл мочи добавляют 1 мл реактива Фелинга и смесь слегка нагревают в пламени горелки до закипания. При наличии глюкозы наблюдается изменение цвета раствора на кирпично-красный. Для сравнения проводят реакцию с мочой здорового человека.

б) Унифицированный метод с помощью индикаторных полосок «Глюкотест».

Принцип метода: Метод основан на специфическом окислении глюкозы ферментом глюкозоксидазой до глюконовой кислоты и перекиси водорода в присутствии кислорода. Наличие в индикаторной зоне полоски пероксидазы способствует окислению аурамина, который при этом изменяет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания глюкозы. Этот метод позволяет определить концентрацию глюкозы в моче от 0,03% и выше.

Техника работы.

Полоску «глюкотеста» опускают в свежесобранную мочу индикаторным концом, вынимают и на 2 минуты оставляют на воздухе. Затем сравнивают цвет индикаторной зоны со стандартной цветной шкалой «Глюкотеста» и определяют количество глюкозы. При отсутствии глюкозы цвет не изменится.

в) Количественное определение глюкозы в моче методом Альтгаузена.

Принцип метода: Метод основан на том, что моча, содержащая глюкозу, при кипячении со щелочью приобретает различные оттенки цветов – от желтого до тёмно-бурого – в зависимости от содержания глюкозы. Продуктами реакции являются молочная кислота и гуминовые вещества.

Техника работы.

3-4 мл мочи смешивают в пробирке с 1 мл 10% NaOH, кипятят в течение 1 минуты и оставляют на 10 минут в штативе. Сравнивают визуально полученный цвет в пробирке со стандартной шкалой Альтгаузена. Можно провести колориметрию исследуемого раствора с одним из растворов стандартной шкалы. Результат будет более точным.

Обосновать полученные результаты, исходя из того, что у здоровых людей глюкоза в моче этими методами на определяется.

Работа 9. Качественное и количественное определение кетоновых тел в моче.

а) Качественные реакции на кетоновые тела.

Реакция Легаля.

Принцип метода: Ацетон и ацетоуксусная кислота образуют в щелочной среде с нитропруссидом натрия продукты, окрашенные в красный цвет. При добавлении концентрированной уксусной кислоты образуется комплексная соль вишнёвого цвета.

Техника работы.

Берут 2 пробирки, в одну вносят 0,5 мл мочи здорового человека, во вторую – 0,5 мл патологической мочи (больного сахарным диабетом). В обе пробирки добавляют по 0,5 мл 10% NaOH и по 5 капель нитропруссида натрия. Наблюдают окрашивание в пробирках. Добавляют в обе пробирки по 5-6 капель концентрированной уксусной кислоты. Отмечают изменение цвета в пробирках. При сравнении их делают вывод о наличии или отсутствии в моче ацетона.

Реакция Герхарда.

Принцип метода: При добавлении к моче раствора FeCl₃ выпадает в осадок фосфат железа (FeРО₄). При наличии ацетоуксусной кислоты после добавления избытка FeCl₃ появляется вишнёво-красное окрашивание (при лёгком нагревании реакция проходит активнее).

Техника работы.

Берут 2 пробирки. В первую вносят 2 мл мочи здорового человека, во вторую – 2 мл мочи больного сахарным диабетом. В каждую пробирку добавляют по каплям 10% FeCl₃. Образовавшийся осадок фосфатов отфильтровывают с помощью бумажного фильтра. К фильтрату добавляют еще несколько капель FeCl₃, наблюдают появление окрашивания. При сравнении цвета в обеих пробирках делают вывод о наличии или отсутствии ацетоуксусной кислоты в моче.

б) Количественное определение кетоновых тел в моче.

Принцип метода: Ацетон в присутствии нитропруссида натрия и уксусной кислоты при наслаивании аммиака образует фиолетовое кольцо, скорость появления которого зависит от концентрации ацетона. Установлено, что появления кольца между 3-4 мин соответствует содержанию ацетона 8,5 мг /1 л мочи.

Техника работы.

Берут 5 пробирок, в каждую вливают по 1 мл Н₂О. В первую добавляют мочу, содержащую ацетон (!), перемешивают, получают разведение мочи в 2 раза. Отбирают 1 мл этой мочи из первой пробирки и переносят во вторую, перемешивают, получая разведение в 4 раза. Из этой пробирки 1 мл мочи переносят в третью (разведение в 8 раз) и так до последней. Из последней пробирки 1 мл смеси выливают (во всех пробирках остаётся по 1 мл смеси). Затем во все пробирки добавляют по 8 капель 50% (NH₄)₂SO₄, по 8 капель нитропруссида натрия и по 8 капель концентрированной уксусной кислоты. Содержимое пробирок перемешивают и в каждую по стенкам наcлаивают по 0,5 мл концентрированного аммиака, начиная из последней пробирки. К концу 4 мин отмечают последнюю пробирку, где еще заметно фиолетовое кольцо.

Расчёт ведут по формуле:

Х = 8,5 ×а × 1,5

Х – концентрация ацетона в моче (мг/сутки);

8,5 – эмпирическое число;

а – разведение мочи;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи (1,5 л).

По результатам делают вывод о количестве ацетона в исследуемой моче, исходя из того, что у здоровых людей оно не превышает 40 мг в сутки.

Программа самоподготовки студентов к занятию

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

1. Функции печени.

2. Роль печени в обмене углеводов, липидов и белков.

3. Участие печени в регуляции витаминного и водно-минерального обмена.

4. Желчеобразующая и экскреторная роль печени.

5. Катаболизм Нв, образование жёлчных пигментов.

6. Понятие о “прямом” и “непрямом” билирубине, истинном уробилине.

7. Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.

8. Клиническое значение анализа билирубина в сыворотке крови и метод его определения.

9. Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

10. Типы реакций биотрансформации инородных и эндогенных химических соединений в печени.

11. Реакции микросомального окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ.

12. Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное значение.

13. Клиническое значение исследования функционального состояния печени с помощью тимоловой пробы и качественной реакции на индикан.

II Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

1. Функции почек в организме:

а) выделение конечных продуктов обмена;

б) регуляция кислотно-щелочного равновесия;

в) регуляция водно-солевого обмена, кровяного давления;

г) эндокринная функция.

2. Особенности биохимических процессов в почках.

3. Механизм образования мочи (фильтрация, реабсорбция, секреция).

4. Представление о клиренсе.

5. Регуляция образования мочи.

6. Физико-химические свойства и составные части мочи:

а) суточный объем и физико-химические свойства мочи;

б) минеральные компоненты мочи;

в) органические компоненты мочи.

7. Методы исследования физико-химических свойств, определение общего азота мочи, диагностическое значение.

8. Патологические компоненты мочи, которые вызваны определенными нарушениями обмена веществ в организме:

а) глюкозурия;

б) кетонурия;

в) билирубинурия;

г) уробилинурия;

д) креатинурия;

ж) индиканурия;

з)фенилкетонурия.

9. Причины изменения содержания в моче нормальных компонентов:

а) мочевины

б) креатинина;

в) аминокислот;

г) мочевой кислоты;

д) ферментов;

ж) неорганических веществ;

з) общего азота.

3. Показатели, которые свидетельствуют о нарушении функции почек:

а) протеинурия;

б) гематурия;

в) глюкозурия;

г) пиурия;

д) креатинурия.

10. Методы определения в моче белка, глюкозы, кетоновых тел, крови. Диагностическое значение.

Семинарское обсуждение теоретических вопросов: 12.30-14.00 час.

Образцы тестовых заданий и ситуационных задач (привести 5-6 примеров).

1. Показатель тимоловой пробы исследуемой сыворотки крови составляет 20 ЕД. Дайте оценку полученному результату.

2. Реакция на индикан в моче положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?

3. В моче человека обнаружен билирубинглюкурониды и мезобилирубиноген (уробилиноген). В сыворотке крови содержание общего билирубина составляет 40 мкмоль/л, прямого билирубина 25 мкмоль/л, непрямого-15 мкмоль/л, кал гипохолический. О чем свидетельствуют данные показатели?

4. У больного желтухой общий билирубин составляет 54 мкмоль/л, прямой билирубин-29 мкмоль/л, непрямой-25 мкмоль/л. Кал ахолический. В моче положительная реакция на билирубин. Какое заболевание можно предположить?

5. У пациента за сутки выделяется более 2 л мочи. Как оценить такой результат? Возможные причины такого состояния.

6. У больного выделяется моча с удельным весом 1,035. Отвечает ли это норме? Какие причины такого состояния?

7. За сутки больной выделяет 30 г общего азота с мочой. Какие процессы в организме могли привести к этому?

8. При исследовании порций мочи, собранных в отдельные посудины на протяжении суток, оказалось, что удельный вес мочи колеблется в пределах 1,008-1,012. Как трактовать такое состояние? Когда это может наблюдаться?

9. У больного суточный диурез составляет 3,5 литра. В моче обнаружены глюкоза и кетоновые тела. Какие причины и возможные последствия такого состояния?

10. У больного обнаружено увеличение содержания мочевины и креатинина в крови и уменьшение их в моче. Какие возможные причины и следствия такого состояния?

Cамостоятельная работа студентов: 14.15 – 15.00 час.

Студент должен знать:

1. Распад гемоглобина в тканях.

2. Механизм детоксикации билирубина.

3. Понятие о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.

4. Виды желтух, их биохимическая характеристика.

5. Значение анализа билирубина для клинической практики.

6. Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

7. Функции почек, механизм и регуляция образования мочи.

8. Роль почек в регуляции гомеостаза.

9. Физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека и их изменения при заболеваниях почек и нарушениях процесса обмена в организме.

Студент должен уметь:

1. Определять содержание общего билирубина в сыворотке крови, объяснять значение данного анализа в диагностике желтух.

2. Определить наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию печени.

3. Провести тимоловую пробу с сывороткой крови, обьяснить её значение в диагностике белоксинтезирующей функции печени.

4. Исследовать физико-химические свойства мочи.

5. Определить содержание общего азота мочи.

6. Определить наличие и количество глюкозы, белка, ацетона, наличие крови в моче.

7. Обосновать значение этих анализов в клинической практике.

Эталоны ответов на тесты и ситуационные задачи:

1. Имеет место повышение показателя, что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной желтухе.

2. Обезвреживающая функция печени не нарушена.

3. У больного паренхиматозная желтуха.

4. Механическая желтуха.

5. Наблюдается полиурия. Возможные причины: употребление мочегонных средств, сахарный диабет, несахарный диабет, некоторые нервные заболевания, болезни почек, употребление большого количества жидкости.

6. Удельный вес мочи повышен (гиперстенурия). Это возможно при потере воды организмом (длительное пребывание в горячем климате, рвота, диарея, высокая температура тела), при некоторых заболеваниях почек, сахарном диабете.

7. Увеличение содержания общего азота в моче может свидетельствовать о повышенном употреблении белковых продуктов или усиленном распаде белков в организме (лихорадочные состояния, злокачественные опухоли, туберкулезный процесс, рассасывание эксудатов и транссудатов).

8. Имеет место изостенурия, что может быть при тяжелой почечной недостаточности, когда почки теряют концентрационную способность и выделяют мочу с плотностью, которая не отличается от плотности первичной мочи.

9. Сочетание полиурии, глюкозурии и кетонурии возможно при недостаточности инсулина (сахарном диабете), при этом нарушается углеводный, белковый, липидный и водно-минеральный обмены, может возникнуть кетоз.

10. Заболевание, которое приводит к почечной недостаточности. Следствие - интоксикация организма (уремия).

Источники информации:

Основные:

Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.
Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.
Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.
Конспекты лекций.
Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Материали для подготовки к практическим занятиям > Кафедра медицинской биохимии > Биологическая химия > Стоматологический факультет > Биохимические функции печени.
Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Презентации лекций > Кафедра медицинской биохимии > Биологическая химия > Стоматологический факультет > Гормоны, общая характеристика, классификация. Гормоны гипофиза. Гормоны щитовидной, паращитовидной, поджелудочной, половых желез, гормоны надпочечных желез. Витамины как компоненты питания человека. Биохимия крови. Биохимические функции печени. Биохимия желтух.

Дополнительные:

1. Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

Методическое указание составила доц. Яворская С.И

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня 2013 г. протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа 2013 г. протокол № 2

. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков. - 3 час.

2. Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи. -3 час.

Методика выполнения практической работы: - 9.00-12.00 час. при 6-часовом занятии

Работа 1. Провести определение общего билирубина в сыворотке крови.

Ход работы

Расчёт по формуле:

С_ст´Э_оп

Х= -------------, где:

Э_оп

Х – концентрация билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);

Э_оп и Э_ст – экстинкции опытной и стандартной проб.

Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).

Ход работы

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Ход работы

Работа 4. Определить физико-химические свойства мочи.

а) Определение рН мочи.

б) Определение удельного веса мочи.

Ход работы

в) Определение цвета, запаха, прозрачности мочи проводят органолептическим способом.

Работа 5. Определить общий азот мочи.

Ход работы

Расчет проводят по формуле :

Эоп × Сст

Соп = --------------- × 1,5, где:

Эст

Эоп и Эст – экстинкции опыта и стандарта;

Сст – концентрация стандарта (г/л) указана на флаконе с реактивом;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи;

Соп – концентрация общего азота мочи (г/сутки).

Работа 6. Работа 3. Качественные реакции на белок в моче и определение его количества.

Ход работы

Реакция Геллера.

Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

Ход работы

Расчет:

Если кольцо еще заметно в пробирке с разведением 8, то содержание белка составляет:

0,033 г/л × 8 = 0,246 г/л (или ‰).

Оценить результат и указать возможные причины протеинурии.

Работа 7. Качественная реакция на кровь (бензидиновая проба).

Ход работы

Отметить возможные причины гематурии.

Работа 8. Качественное и количественное определение глюкозы в моче.

а) Реакция Фелинга.

Ход работы

б) Унифицированный метод с помощью индикаторных полосок «Глюкотест».

Техника работы.

в) Количественное определение глюкозы в моче методом Альтгаузена.

Техника работы.

Работа 9. Качественное и количественное определение кетоновых тел в моче.

а) Качественные реакции на кетоновые тела.

Реакция Легаля.

Техника работы.

Реакция Герхарда.

Техника работы.

б) Количественное определение кетоновых тел в моче.

Техника работы.

Расчёт ведут по формуле:

Х = 8,5 ×а × 1,5

Х – концентрация ацетона в моче (мг/сутки);

8,5 – эмпирическое число;

а – разведение мочи;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи (1,5 л).

Программа самоподготовки студентов к занятию

1. Функции печени.

2. Роль печени в обмене углеводов, липидов и белков.

3. Участие печени в регуляции витаминного и водно-минерального обмена.

4. Желчеобразующая и экскреторная роль печени.

5. Катаболизм Нв, образование жёлчных пигментов.

6. Понятие о “прямом” и “непрямом” билирубине, истинном уробилине.

7. Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.

8. Клиническое значение анализа билирубина в сыворотке крови и метод его определения.

9. Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

10. Типы реакций биотрансформации инородных и эндогенных химических соединений в печени.

11. Реакции микросомального окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ.

12. Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное значение.

1. Функции почек в организме:

а) выделение конечных продуктов обмена;

б) регуляция кислотно-щелочного равновесия;

в) регуляция водно-солевого обмена, кровяного давления;

г) эндокринная функция.

2. Особенности биохимических процессов в почках.

3. Механизм образования мочи (фильтрация, реабсорбция, секреция).

4. Представление о клиренсе.

5. Регуляция образования мочи.

6. Физико-химические свойства и составные части мочи:

а) суточный объем и физико-химические свойства мочи;

б) минеральные компоненты мочи;

в) органические компоненты мочи.

7. Методы исследования физико-химических свойств, определение общего азота мочи, диагностическое значение.

8. Патологические компоненты мочи, которые вызваны определенными нарушениями обмена веществ в организме:

а) глюкозурия;

б) кетонурия;

в) билирубинурия;

г) уробилинурия;

д) креатинурия;

ж) индиканурия;

з)фенилкетонурия.

9. Причины изменения содержания в моче нормальных компонентов:

а) мочевины

б) креатинина;

в) аминокислот;

г) мочевой кислоты;

д) ферментов;

ж) неорганических веществ;

з) общего азота.

3. Показатели, которые свидетельствуют о нарушении функции почек:

а) протеинурия;

б) гематурия;

в) глюкозурия;

г) пиурия;

д) креатинурия.

10. Методы определения в моче белка, глюкозы, кетоновых тел, крови. Диагностическое значение.

Семинарское обсуждение теоретических вопросов и практической работы:

- 12.30-14.00 час. при 6-часовом занятии

Образцы тестовых заданий и ситуационных задач (привести 5-6 примеров).

2. Реакция на индикан в моче положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?

6. У больного выделяется моча с удельным весом 1,035. Отвечает ли это норме? Какие причины такого состояния?

7. За сутки больной выделяет 30 г общего азота с мочой. Какие процессы в организме могли привести к этому?

Исходный уровень знаний и умений проверяется путем решения ситуационных задач по каждой теме, ответами на тесты типа "Крок", конструктивные вопросы и тому подобное (14¹⁵ - 15⁰⁰ час.).

Студент должен знать:

1. Распад гемоглобина в тканях.

2. Механизм детоксикации билирубина.

3. Понятие о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.

4. Виды желтух, их биохимическая характеристика.

5. Значение анализа билирубина для клинической практики.

6. Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

7. Функции почек, механизм и регуляция образования мочи.

8. Роль почек в регуляции гомеостаза.

Студент должен уметь:

2. Определить наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию печени.

4. Исследовать физико-химические свойства мочи.

5. Определить содержание общего азота мочи.

6. Определить наличие и количество глюкозы, белка, ацетона, наличие крови в моче.

7. Обосновать значение этих анализов в клинической практике.

Эталоны ответов на тесты и ситуационные задачи:

1. Имеет место повышение показателя, что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной желтухе.

2. Обезвреживающая функция печени не нарушена.

3. У больного паренхиматозная желтуха.

4. Механическая желтуха.

10. Заболевание, которое приводит к почечной недостаточности. Следствие - интоксикация организма (уремия).

Источники информации:

Основные:

Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.
Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.
Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.
Конспекты лекций.
Веб-страница университета > Материалы для подготовки к практическим занятиям.
Веб-страница университета > Презентации лекций.

Дополнительные:

1. Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня 2013 г. протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа 2013 г. протокол № 2

Пошук:

Oddsei - What are the odds of anything.