Методические указания

Методические указания

к практическим занятиям для студентов стоматологического факультета.

 

ЗАНЯТИЕ № 12 (практическое - 6 час.)

Темы:

1. Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

2. Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

Цель: Уметь определять содержание билирубина в сыворотке крови и применять знание об обмене хромопротеинов для объяснения механизма возникновения желтух Уметь выполнять тимолову пробу и качественную реакцию на индикан и использовать полученные результаты  для оценки функционального состояния печени.

Уметь исследовать физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека, объяснить механизм образования мочи, определять патологические компоненты мочи и использовать полученные данные для диагностики болезней почек и нарушения обмена веществ в организме.

 

Профессиональная ориентация студентов: Печень является главным органом обезвреживания токсических веществ, в частности продуктов гниения белков (индола, скатола и др.), потому определение содержания индикана в моче является важным признаком  детоксикационной функции печени и усиления гнилостных процессов в кишечнике. Билирубин относится к желчным пигментам, является токсичным веществом, обезвреживается в клетках печени. Нагромождение билирубина в крови выше 35 мкмоль/л приводит к  откладыванию его в тканях, появлению желтухи. Потому определение содержания билирубина в сыворотке крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики желтух.

Данные анализа мочи, соединенные с клиническими наблюдениями, помогают установить характер хода патологического процесса и имеют диагностическое значение. Клинический анализ мочи является обязательной составной частью общего обследования больного. При патологических состояниях, которые связаны с расстройством обмена веществ и нарушениям деятельности тех или других органов (почек, печени, сердца, пищеварительных органов), происходит изменение состава крови, что неминуемо влияет на состав мочи.

 

Методика выполнения практической работы: - 9.00-12.00 час.

Выполнение практической работы происходит согласно с “Методическими указаниями для студентов” с обязательным выводом в конце каждой работы.

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

 Работа 1. Провести определение общего билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин образует с диазореактивом соединение (азобилирубин) розового цвета. Интенсивность цвета пропорциональна концентрации билирубина и определяется колориметрически. Свободный (непрямой) билирубин нерастворимый, поэтому его предварительно переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива.

Ход работы

К 0,5 мл сыворотки крови добавляют 0, 25 мл смеси диазореактива ( 10 мл диазореактива № 1 смешивают с 0, 3 мл диазореактива № 2) и 1, 75 мл кофеинового реактива. Перемешивают и оставляют пробирку на 10 мин., после чего колориметрируют на ФЭКе при зелёном светофильтре в кювете 5 мм против воды. Стандартный раствор билирубина (10 мкмоль/л) колориметрируют при этих же условиях. Он приготовлен в лаборатории кафедры.

Расчёт по формуле:

        Сст´Эоп

Х= -------------, где:

           Эоп

 

Х – концентрация билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);

Эоп и Эст – экстинкции опытной и стандартной проб.

 

Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме концентрация общего билирубина в крови составляет 1, 7 – 20, 5 мкмоль/л. Увеличение в крови билирубина выше 35 мкмоль/л приводит к отложению его в тканях, появление желтухи. Однако для диагностики и дифференциации желтух необходимо определение соотношения свободного (непрямого) и связанного (прямого) билирубина. В норме их содержание соответственно составляет 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л и 0, 86 – 4, 3 мкмоль/л.

 

Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).

Принцип метода. При действии концентрированной НСl индикан гидролизует с образованием индола, который окисляется с помощью FeCl3 в индоксил и синее индиго.

Ход работы

К 4 мл мочи добавляют 0, 4 мл раствора ацетата свинца (CH3COOPb) для осаждения жёлчных пигментов, солей и др. веществ. Фильтруют, затем 1 -2 мл фильтрата смешивают с равным объёмом реактива Обермейера (раствор FeCl3 в концентрированной НСl), добавляют 0, 5 – 1 мл хлороформа и осторожно перемешивают. Наблюдают несколько минут. Если нижний хлороформный слой окрашивается в синий или красноватый цвет, реакция считается положительной. В норме реакция отрицательная.

Положительная реакция свидетельствует об усилении процессов гниения белков в организме, но обезвреживающая функция печени не нарушена.

 

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Принцип метода. Проба основана на определении степени помутнения смеси сыворотки крови с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере, что обусловлено его взаимодействием с крупнодисперсными белками сыворотки – гамма-глобулинами и липопротеинами низкой плотности. Проба становится положительной при уменьшении содержания альбумина и увеличением бета- и гамма-глобулинов.

Ход работы

В пробирку вносят 4, 8 мл тимолового реактива, добавляют 0,08 мл сыворотки крови, перемешивают, выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Фотометрируют против тимолового реактива при длине волны 630-690 нм. Степень помутнения находят по калибровочному графику. Калибровочный график приготовлен в лаборатории кафедры.  В норме тимоловая проба соответствует 0 – 5 ед. помутнения.

Повышение показателей (положительная проба, больше 5 ед.) отмечается при гепатитах, эндокардите. При механической желтухе, ревматизме проба отрицательная.

 

ІІ Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

Работа 4. Определить физико-химические свойства мочи.

а) Определение рН мочи.

Реакцию мочи определяют с помощью индикаторов – синей и красной лакмусовой бумаги. Наносят каплю мочи на лакмусовые бумажки. При нейтральной реакции индикаторы не меняют цвет, при кислой реакции синяя лакмусовая бумажка краснеет, при щелочной – красная бумажка синеет.

б) Определение удельного веса мочи.

Для определения удельного веса мочи используются урометры. Они бывают двух видов – для мочи с низким и нормальным удельным весом с делениями от 1,000 до 1,030, и для мочи с высоким удельным весом  с делениями от 1,020 до 1,060.

Ход работы

Мочу наливают в стеклянный цилиндр (по стенке, медленно, чтобы не образовывалась пена). Определение начинают с  урометра первого типа. Его опкускают в мочу медленно. Когда урометр перестает опускаться, его нужно слегка толкнуть сверху, после чего он, сделав несколько движений вверх-вниз, остановится. По нижнему мениску шкалы урометра определяют удельную плотность мочи. Если  урометр первого вида выталкивается мочой и он не опускается до шкалы, значит, удельная плотность мочи высокая и для определения используют  урометр второго вида. Исследования надо проводить при температуре 15 0С. Если температура выше, то на каждые +3º добавляют 0,001 к показателям шкалы и если ниже на 3º – отнимают .

В норме удельная плотность мочи при температуре 15 0С составляет 1.015-1.025, но в отдельных порциях в течение суток эти колебания значительно шире.

в) Определение цвета, запаха, прозрачности мочи проводят органолептическим способом.

 

Работа 5. Определить общий азот мочи.

Принцип метода. От азотсодержащих веществ мочи при нагревании в присутствии концентрированной H2SO4  (минерализация) отщепляется аммиак, который превращается в сульфат аммония (NH4)2SO4.  Последний определяется с помощью|посредством| реактива Несслера (образуется соединение оранжевого цвета). Интенсивность цвета  прямо зависит от концентрации аммиака и определяется колориметрически.

Ход работы

Минерализат мочи получают в лабораиории. Для определения общего азота в одну пробирку вносят 0,5 мл минерализата, во вторую – 0,5 мл стандартного раствора (NH4)2SO4. В обе пробирки добавляют по 6,5 мл воды и по 0,5 мл реактива Несслера. Растворы хорошо перемешивают и определяют оптическую плотность на ФЭКе при зеленом светофильтре в кювете 3 мм против воды.

Расчет проводят по формуле :

                                                Эоп × Сст

                                  Соп =   ---------------  × 1,5, где:

                                                       Эст

 

      Эоп и Эст – экстинкции опыта и стандарта;

       Сст – концентрация стандарта (г/л) указана на флаконе с реактивом;

       1,5 – пересчёт на суточное количество мочи;

        Соп – концентрация общего азота мочи (г/сутки).

                     Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме содержание общего азота мочи составляет 10-18 г/сутки (или 428,4-1213 ммоль/сутки).

 

Работа 6. Работа  3. Качественные реакции на белок в моче и определение его количества.

 

Принцип метода. Для определения белка используют реакции осаждения при помощи азотной или сульфосалициловой кислоты (последняя более чувствительна, осаждает и пептиды).

Ход работы

Реакция Геллера.

В пробирку вносят 10 капель концентрированной азотной кислоты. Слегка наклонив пробирку, по стенке вливают 10 капель мочи. В присутствии белка на границе жидкостей образуется осадок в виде кольца помутнения. Такую же реакцию можно проделать с сульфосалициловой кислотой. Для сравнения реакции проводят с мочой здорового человека.

 

Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

Принцип метода. Используя реакцию Геллера и тот экспериментально установленный факт, что образование кольца помутнения между 2 и 3 мин соответствуют концентрации белка 0,033 г/л, определяют содержание белка в моче путем её разведения.

Ход работы

В 5 пробирок вносят по 1 мл дистиллированной воды. В первую добавляют 1 мл мочи, в которой обнаружен белок. Содержимое пробирки перемешивают и 1 мл раствора переносят во вторую пробирку, после перемешивания 1 мл переносят в третью и так до последней, из последней пробирки 1 мл смеси выливают. Следовательно, в каждой из 5 пробирок остается по 1 мл мочи, разведенной последовательно в 2, 4, 8, 16, 32 раза. В 5 других пробирок вносят по 1 мл концентрированной HNO3. Разведенную мочу наслаивают, начиная из последней пробирки, на азотную кислоту. По истечении 3-х минут отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, где еще заметно кольцо помутнения.

Расчет:

Если кольцо еще заметно в пробирке с разведением 8, то содержание белка составляет:

0,033 г/л × 8 = 0,246 г/л (или ‰).

Оценить результат и указать возможные причины протеинурии.

 

Работа  7. Качественная реакция на кровь (бензидиновая проба).

Принцип метода. При наличии крови в моче пероксидаза, используя как акцептор електронов Н2О2, окисляет бензидин с образованием окрашенных продуктов реакции.

Ход работы

К 5 каплям 1 % бензидина добавляют 5 капель 3 % Н2О2 и 5 капель исследуемой мочи.При наличии крови наблюдается появление синего цвета (окисленный бензидин).

Отметить возможные причины гематурии.

 

Работа 8. Качественное и количественное определение глюкозы в моче.

а) Реакция Фелинга.

Принцип метода основан на восстанавливающих свойствах глюкозы за счёт окисления альдегидной группы (восстанавливается гидроксид меди до оксида меди).

Ход работы

К 1 мл мочи добавляют 1 мл  реактива Фелинга и смесь слегка нагревают в пламени горелки до закипания. При наличии глюкозы наблюдается изменение цвета раствора на кирпично-красный. Для сравнения проводят реакцию с мочой здорового человека.

б) Унифицированный метод с помощью индикаторных полосок «Глюкотест».

Принцип метода: Метод основан на специфическом окислении глюкозы ферментом глюкозоксидазой до глюконовой кислоты и перекиси водорода в присутствии кислорода. Наличие в индикаторной зоне полоски пероксидазы способствует окислению аурамина, который при этом изменяет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания глюкозы. Этот метод позволяет определить концентрацию глюкозы в моче от 0,03% и выше.

Техника работы.

Полоску «глюкотеста» опускают в свежесобранную мочу индикаторным концом, вынимают и на 2 минуты оставляют на воздухе. Затем сравнивают цвет индикаторной зоны со стандартной цветной шкалой «Глюкотеста» и определяют количество глюкозы. При отсутствии глюкозы цвет не изменится.

 

в) Количественное определение глюкозы в моче методом Альтгаузена.

Принцип метода: Метод основан на том, что моча, содержащая глюкозу, при кипячении со щелочью приобретает различные оттенки цветов – от желтого до тёмно-бурого – в зависимости от содержания глюкозы. Продуктами реакции являются молочная кислота и гуминовые вещества.

Техника работы.

 3-4 мл мочи смешивают в пробирке с 1 мл 10% NaOH, кипятят в течение 1 минуты и оставляют на 10 минут в штативе. Сравнивают визуально полученный цвет в пробирке со стандартной шкалой Альтгаузена. Можно провести колориметрию исследуемого  раствора с одним из растворов стандартной шкалы. Результат будет более точным.

Обосновать полученные результаты, исходя из того, что у здоровых людей глюкоза в моче этими методами на определяется.

 

Работа 9. Качественное и количественное определение кетоновых тел в моче.

а) Качественные  реакции на кетоновые тела.

Реакция Легаля.

Принцип метода: Ацетон и ацетоуксусная кислота образуют в щелочной среде с нитропруссидом натрия продукты, окрашенные в красный цвет. При добавлении концентрированной уксусной кислоты образуется комплексная соль вишнёвого цвета.

Техника работы.

Берут 2 пробирки, в одну вносят 0,5 мл мочи здорового человека, во вторую – 0,5 мл патологической мочи (больного сахарным диабетом). В обе пробирки добавляют по 0,5 мл 10% NaOH и  по 5 капель нитропруссида натрия. Наблюдают окрашивание в пробирках. Добавляют в обе пробирки по 5-6 капель концентрированной уксусной кислоты. Отмечают изменение цвета в пробирках. При сравнении их делают вывод о наличии или отсутствии в моче ацетона.

Реакция Герхарда.

Принцип метода: При добавлении к моче раствора FeCl3 выпадает в осадок фосфат железа  (FeРО4). При наличии ацетоуксусной кислоты после добавления избытка FeCl3 появляется вишнёво-красное окрашивание (при лёгком нагревании реакция проходит активнее).

Техника работы.

Берут 2 пробирки. В первую вносят 2 мл мочи здорового человека, во вторую – 2 мл мочи больного сахарным диабетом. В каждую пробирку добавляют по каплям 10% FeCl3. Образовавшийся осадок фосфатов отфильтровывают с помощью бумажного фильтра. К фильтрату добавляют еще несколько капель FeCl3, наблюдают появление окрашивания. При сравнении цвета в обеих пробирках делают вывод о наличии или отсутствии ацетоуксусной кислоты в моче.

 

б)  Количественное определение кетоновых тел в моче.

Принцип метода: Ацетон в присутствии нитропруссида натрия и уксусной кислоты при наслаивании аммиака образует фиолетовое кольцо, скорость появления которого зависит от концентрации ацетона. Установлено, что появления кольца между 3-4 мин соответствует содержанию ацетона 8,5 мг /1 л мочи.

Техника работы.

Берут 5 пробирок, в каждую вливают по 1 мл Н2О. В первую добавляют мочу, содержащую ацетон (!), перемешивают, получают разведение мочи в 2 раза. Отбирают 1 мл этой мочи из первой пробирки и переносят во вторую, перемешивают, получая разведение в 4 раза. Из этой пробирки 1 мл мочи переносят в третью (разведение в 8 раз) и так до последней. Из последней пробирки 1 мл смеси выливают (во всех пробирках остаётся по 1 мл смеси). Затем во все пробирки добавляют по 8 капель 50% (NH4)2SO4, по 8 капель нитропруссида натрия и по 8 капель концентрированной уксусной кислоты. Содержимое пробирок перемешивают и в каждую по стенкам наcлаивают по 0,5 мл концентрированного аммиака, начиная из последней пробирки. К концу 4 мин отмечают последнюю пробирку, где еще заметно фиолетовое кольцо.

Расчёт ведут по формуле:

Х = 8,5 ×а × 1,5

Х – концентрация ацетона в моче (мг/сутки);

8,5 – эмпирическое число;

а – разведение мочи;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи (1,5 л).

По результатам делают вывод о количестве ацетона в исследуемой моче, исходя из того, что у здоровых людей оно не превышает 40 мг в сутки.

 

Программа самоподготовки студентов к занятию

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

1.             Функции печени.

2.             Роль печени в обмене углеводов, липидов и белков.

3.             Участие печени в регуляции витаминного и водно-минерального обмена.

4.             Желчеобразующая и экскреторная роль печени.

5.             Катаболизм Нв, образование жёлчных пигментов.

6.             Понятие о “прямом” и “непрямом” билирубине, истинном уробилине.

7.             Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.

8.             Клиническое значение анализа билирубина в сыворотке крови и метод его определения.

9.             Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

10.        Типы реакций биотрансформации инородных и эндогенных химических  соединений  в  печени. 

11.        Реакции  микросомального  окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ. 

12.        Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное значение.

13.        Клиническое значение исследования функционального состояния печени с помощью тимоловой пробы и качественной реакции на индикан.

II Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

1. Функции почек в организме:

а) выделение конечных продуктов обмена;

б) регуляция кислотно-щелочного равновесия;

в) регуляция водно-солевого обмена, кровяного давления;

г) эндокринная функция.

2. Особенности биохимических процессов в почках.

3. Механизм образования мочи (фильтрация, реабсорбция, секреция).

4. Представление о клиренсе.

5. Регуляция образования мочи.

6. Физико-химические свойства и составные части мочи:

а) суточный объем и физико-химические свойства мочи;

б) минеральные компоненты мочи;

в) органические компоненты мочи.

7. Методы исследования физико-химических свойств, определение общего азота мочи, диагностическое значение.

8. Патологические компоненты мочи, которые вызваны определенными нарушениями обмена веществ в организме:

а) глюкозурия;

б) кетонурия;

в) билирубинурия;

г) уробилинурия;

д) креатинурия;

ж) индиканурия;

з)фенилкетонурия.

9. Причины изменения содержания в моче нормальных компонентов:

а) мочевины

б) креатинина;

в) аминокислот;

г) мочевой кислоты;

д) ферментов;

ж) неорганических веществ;

з) общего азота.

3. Показатели, которые свидетельствуют о нарушении функции почек:

а) протеинурия;

б) гематурия;

в) глюкозурия;

г) пиурия;

д) креатинурия.

10. Методы определения в моче белка, глюкозы, кетоновых тел, крови. Диагностическое значение.

 

Семинарское обсуждение теоретических вопросов: 12.30-14.00 час.

 

Образцы тестовых заданий и ситуационных задач (привести 5-6 примеров).

1. Показатель тимоловой пробы исследуемой сыворотки крови составляет    20 ЕД. Дайте оценку полученному результату.

2. Реакция на индикан в моче положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?

3. В моче человека обнаружен билирубинглюкурониды и мезобилирубиноген (уробилиноген). В сыворотке крови содержание общего билирубина составляет 40 мкмоль/л, прямого билирубина 25 мкмоль/л, непрямого-15 мкмоль/л, кал гипохолический. О чем свидетельствуют данные показатели?

4. У больного желтухой общий билирубин составляет 54 мкмоль/л, прямой билирубин-29 мкмоль/л, непрямой-25 мкмоль/л. Кал  ахолический. В моче положительная реакция на билирубин. Какое заболевание можно предположить?

5. У пациента за сутки выделяется более 2 л мочи. Как оценить такой результат? Возможные причины такого состояния.

6. У больного выделяется моча с удельным весом 1,035. Отвечает ли это норме? Какие причины такого состояния?

7. За сутки больной выделяет 30 г общего азота с мочой. Какие процессы в организме могли привести к этому?

8. При исследовании порций мочи, собранных в отдельные посудины на протяжении суток, оказалось, что удельный вес мочи колеблется в пределах 1,008-1,012. Как трактовать такое состояние? Когда это может наблюдаться?

9. У больного суточный диурез составляет 3,5 литра. В моче обнаружены глюкоза и кетоновые тела. Какие причины и возможные последствия такого состояния?

10. У больного обнаружено увеличение содержания мочевины и креатинина в крови и уменьшение их в моче. Какие возможные причины и следствия такого состояния?

 

Cамостоятельная работа студентов: 14.15 – 15.00 час.

Студент должен знать:

1.           Распад гемоглобина в тканях.

2.           Механизм детоксикации билирубина.

3.           Понятие о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.

4.           Виды желтух, их биохимическая характеристика.

5.           Значение анализа билирубина для клинической практики.

6.           Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

7.           Функции почек, механизм и регуляция образования мочи.

8.           Роль почек в регуляции гомеостаза.

9.           Физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека и их изменения при заболеваниях почек и нарушениях процесса обмена в организме.

 

Студент должен уметь:

1.           Определять содержание общего билирубина в сыворотке крови, объяснять значение данного анализа в диагностике желтух.

2.           Определить наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию печени.

3.           Провести тимоловую пробу с сывороткой крови, обьяснить её значение в диагностике белоксинтезирующей функции печени.

4.           Исследовать физико-химические свойства мочи.

5.           Определить содержание общего азота мочи.

6.           Определить наличие и количество глюкозы, белка, ацетона, наличие крови в моче.

7.           Обосновать значение этих анализов в клинической практике.

 

Эталоны ответов на тесты и ситуационные задачи:

1.      Имеет место повышение показателя, что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной желтухе.

2.      Обезвреживающая функция печени не нарушена.

3.      У больного паренхиматозная желтуха.

4.      Механическая желтуха.

5.      Наблюдается полиурия. Возможные причины: употребление мочегонных средств, сахарный диабет, несахарный диабет, некоторые нервные заболевания, болезни почек, употребление большого количества жидкости.

6.      Удельный вес мочи повышен (гиперстенурия). Это возможно при потере воды организмом (длительное пребывание в горячем климате, рвота, диарея, высокая температура тела), при некоторых заболеваниях почек, сахарном диабете.

7.      Увеличение содержания общего азота в моче может свидетельствовать о повышенном употреблении белковых продуктов или усиленном распаде белков в организме (лихорадочные состояния, злокачественные опухоли, туберкулезный процесс, рассасывание эксудатов и транссудатов).

8.      Имеет место изостенурия, что может быть при тяжелой почечной недостаточности, когда почки теряют концентрационную способность и выделяют мочу с плотностью, которая не отличается от плотности первичной мочи.

9.      Сочетание полиурии, глюкозурии и кетонурии возможно при  недостаточности инсулина (сахарном диабете), при этом нарушается углеводный, белковый, липидный и водно-минеральный обмены, может  возникнуть кетоз.

10. Заболевание, которое приводит к почечной недостаточности. Следствие - интоксикация организма (уремия).

 

Источники информации:

Основные:

  1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.
  2. Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.
  3. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.
  4. Конспекты лекций.
  5. Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Материали для подготовки к практическим занятиям > Кафедра медицинской биохимии > Биологическая химия > Стоматологический факультет > Биохимические функции печени.
  6. Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам >  Презентации лекций > Кафедра медицинской биохимии > Биологическая химия > Стоматологический факультет >  Гормоны, общая характеристика, классификация. Гормоны гипофиза. Гормоны щитовидной, паращитовидной, поджелудочной, половых желез, гормоны надпочечных желез. Витамины как компоненты питания человека. Биохимия крови. Биохимические функции печени. Биохимия желтух.

Дополнительные:

1.     Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2.     Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

  

Методическое указание составила доц. Яворская С.И

 

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня  2013 г. протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа   2013 г. протокол №  2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков. - 3 час.

2. Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи. -3 час.

Цель: Уметь определять содержание билирубина в сыворотке крови и применять знание об обмене хромопротеинов для объяснения механизма возникновения желтух Уметь выполнять тимолову пробу и качественную реакцию на индикан и использовать полученные результаты  для оценки функционального состояния печени.

Уметь исследовать физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека, объяснить механизм образования мочи, определять патологические компоненты мочи и использовать полученные данные для диагностики болезней почек и нарушения обмена веществ в организме.

 

Профессиональная ориентация студентов: Печень является главным органом обезвреживания токсических веществ, в частности продуктов гниения белков (индола, скатола и др.), потому определение содержания индикана в моче является важным признаком  детоксикационной функции печени и усиления гнилостных процессов в кишечнике. Билирубин относится к желчным пигментам, является токсичным веществом, обезвреживается в клетках печени. Нагромождение билирубина в крови выше 35 мкмоль/л приводит к  откладыванию его в тканях, появлению желтухи. Потому определение содержания билирубина в сыворотке крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики желтух.

Данные анализа мочи, соединенные с клиническими наблюдениями, помогают установить характер хода патологического процесса и имеют диагностическое значение. Клинический анализ мочи является обязательной составной частью общего обследования больного. При патологических состояниях, которые связаны с расстройством обмена веществ и нарушениям деятельности тех или других органов (почек, печени, сердца, пищеварительных органов), происходит изменение состава крови, что неминуемо влияет на состав мочи.

 

Методика выполнения практической работы: - 9.00-12.00 час. при 6-часовом занятии

Выполнение практической работы происходит согласно с “Методическими указаниями для студентов” с обязательным выводом в конце каждой работы.

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

 Работа 1. Провести определение общего билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин образует с диазореактивом соединение (азобилирубин) розового цвета. Интенсивность цвета пропорциональна концентрации билирубина и определяется колориметрически. Свободный (непрямой) билирубин нерастворимый, поэтому его предварительно переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива.

Ход работы

К 0,5 мл сыворотки крови добавляют 0, 25 мл смеси диазореактива ( 10 мл диазореактива № 1 смешивают с 0, 3 мл диазореактива № 2) и 1, 75 мл кофеинового реактива. Перемешивают и оставляют пробирку на 10 мин., после чего колориметрируют на ФЭКе при зелёном светофильтре в кювете 5 мм против воды. Стандартный раствор билирубина (10 мкмоль/л) колориметрируют при этих же условиях. Он приготовлен в лаборатории кафедры.

Расчёт по формуле:

        Сст´Эоп

Х= -------------, где:

           Эоп

 

Х – концентрация билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);

Эоп и Эст – экстинкции опытной и стандартной проб.

 

Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме концентрация общего билирубина в крови составляет 1, 7 – 20, 5 мкмоль/л. Увеличение в крови билирубина выше 35 мкмоль/л приводит к отложению его в тканях, появление желтухи. Однако для диагностики и дифференциации желтух необходимо определение соотношения свободного (непрямого) и связанного (прямого) билирубина. В норме их содержание соответственно составляет 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л и 0, 86 – 4, 3 мкмоль/л.

 

Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).

Принцип метода. При действии концентрированной НСl индикан гидролизует с образованием индола, который окисляется с помощью FeCl3 в индоксил и синее индиго.

Ход работы

К 4 мл мочи добавляют 0, 4 мл раствора ацетата свинца (CH3COOPb) для осаждения жёлчных пигментов, солей и др. веществ. Фильтруют, затем 1 -2 мл фильтрата смешивают с равным объёмом реактива Обермейера (раствор FeCl3 в концентрированной НСl), добавляют 0, 5 – 1 мл хлороформа и осторожно перемешивают. Наблюдают несколько минут. Если нижний хлороформный слой окрашивается в синий или красноватый цвет, реакция считается положительной. В норме реакция отрицательная.

Положительная реакция свидетельствует об усилении процессов гниения белков в организме, но обезвреживающая функция печени не нарушена.

 

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Принцип метода. Проба основана на определении степени помутнения смеси сыворотки крови с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере, что обусловлено его взаимодействием с крупнодисперсными белками сыворотки – гамма-глобулинами и липопротеинами низкой плотности. Проба становится положительной при уменьшении содержания альбумина и увеличением бета- и гамма-глобулинов.

Ход работы

В пробирку вносят 4, 8 мл тимолового реактива, добавляют 0,08 мл сыворотки крови, перемешивают, выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Фотометрируют против тимолового реактива при длине волны 630-690 нм. Степень помутнения находят по калибровочному графику. Калибровочный график приготовлен в лаборатории кафедры.  В норме тимоловая проба соответствует 0 – 5 ед. помутнения.

Повышение показателей (положительная проба, больше 5 ед.) отмечается при гепатитах, эндокардите. При механической желтухе, ревматизме проба отрицательная.

 

ІІ Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

Работа 4. Определить физико-химические свойства мочи.

а) Определение рН мочи.

Реакцию мочи определяют с помощью индикаторов – синей и красной лакмусовой бумаги. Наносят каплю мочи на лакмусовые бумажки. При нейтральной реакции индикаторы не меняют цвет, при кислой реакции синяя лакмусовая бумажка краснеет, при щелочной – красная бумажка синеет.

б) Определение удельного веса мочи.

Для определения |густоты| удельного веса мочи используются урометры|урометром|. Они |урометр| бывают двух видов – для мочи с низким и нормальным |густотой| удельным весом с делениями| от 1,000 до 1,030, и для мочи с высоким |густотой| удельным весом  с делениями| от 1,020 до 1,060.

Ход работы

Мочу наливают в стеклянный цилиндр (по стенке, медленно, чтобы не образовывалась пена). Определение начинают с  урометра первого типа. Его опкускают в мочу медленно. Когда урометр перестает опускаться, его нужно слегка толкнуть сверху, после чего он, сделав несколько движений вверх-вниз, остановится. По нижнему мениску шкалы урометра определяют удельную плотность мочи. Если  урометр первого вида выталкивается мочой и он не опускается до шкалы, значит, удельная плотность мочи высокая и для определения используют  урометр второго вида. Исследования надо проводить при температуре 15 0С. Если температура выше, то на каждые +3º добавляют 0,001 к показателям шкалы и если ниже на 3º – отнимают .

В норме удельная плотность мочи при температуре 15 0С составляет 1.015-1.025, но в отдельных порциях в течение суток эти колебания значительно шире.

в) Определение цвета, запаха, прозрачности мочи проводят органолептическим способом.

 

Работа 5. Определить общий азот мочи.

Принцип метода. От азотсодержащих веществ мочи при нагревании в присутствии концентрированной H2SO4  (минерализация) отщепляется аммиак, который превращается в сульфат аммония (NH4)2SO4.  Последний определяется с помощью|посредством| реактива Несслера (образуется соединение оранжевого цвета). Интенсивность цвета  прямо зависит от концентрации аммиака и определяется колориметрически.

Ход работы

Минерализат мочи получают в лабораиории. Для определения общего азота в одну пробирку вносят 0,5 мл минерализата, во вторую – 0,5 мл стандартного раствора (NH4)2SO4. В обе пробирки добавляют по 6,5 мл воды и по 0,5 мл реактива Несслера. Растворы хорошо перемешивают и определяют оптическую плотность на ФЭКе при зеленом светофильтре в кювете 3 мм против воды.

Расчет проводят по формуле :

                                                Эоп × Сст

                                  Соп =   ---------------  × 1,5, где:

                                                       Эст

 

      Эоп и Эст – экстинкции опыта и стандарта;

       Сст – концентрация стандарта (г/л) указана на флаконе с реактивом;

       1,5 – пересчёт на суточное количество мочи;

        Соп – концентрация общего азота мочи (г/сутки).

                     Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме содержание общего азота мочи составляет 10-18 г/сутки (или 428,4-1213 ммоль/сутки).

 

Работа 6. Работа  3. Качественные реакции на белок в моче и определение его количества.

 

Принцип метода. Для определения белка используют реакции осаждения при помощи азотной или сульфосалициловой кислоты (последняя более чувствительна, осаждает и пептиды).

Ход работы

Реакция Геллера.

В пробирку вносят 10 капель концентрированной азотной кислоты. Слегка наклонив пробирку, по стенке вливают 10 капель мочи. В присутствии белка на границе жидкостей образуется осадок в виде кольца помутнения. Такую же реакцию можно проделать с сульфосалициловой кислотой. Для сравнения реакции проводят с мочой здорового человека.

 

Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

Принцип метода. Используя реакцию Геллера и тот экспериментально установленный факт, что образование кольца помутнения между 2 и 3 мин соответствуют концентрации белка 0,033 г/л, определяют содержание белка в моче путем её разведения.

Ход работы

В 5 пробирок вносят по 1 мл дистиллированной воды. В первую добавляют 1 мл мочи, в которой обнаружен белок. Содержимое пробирки перемешивают и 1 мл раствора переносят во вторую пробирку, после перемешивания 1 мл переносят в третью и так до последней, из последней пробирки 1 мл смеси выливают. Следовательно, в каждой из 5 пробирок остается по 1 мл мочи, разведенной последовательно в 2, 4, 8, 16, 32 раза. В 5 других пробирок вносят по 1 мл концентрированной HNO3. Разведенную мочу наслаивают, начиная из последней пробирки, на азотную кислоту. По истечении 3-х минут отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, где еще заметно кольцо помутнения.

Расчет:

Если кольцо еще заметно в пробирке с разведением 8, то содержание белка составляет:

0,033 г/л × 8 = 0,246 г/л (или ‰).

Оценить результат и указать возможные причины протеинурии.

 

Работа  7. Качественная реакция на кровь (бензидиновая проба).

Принцип метода. При наличии крови в моче пероксидаза, используя как акцептор електронов Н2О2, окисляет бензидин с образованием окрашенных продуктов реакции.

Ход работы

К 5 каплям 1 % бензидина добавляют 5 капель 3 % Н2О2 и 5 капель исследуемой мочи.При наличии крови наблюдается появление синего цвета (окисленный бензидин).

Отметить возможные причины гематурии.

 

Работа 8. Качественное и количественное определение глюкозы в моче.

а) Реакция Фелинга.

Принцип метода основан на восстанавливающих свойствах глюкозы за счёт окисления альдегидной группы (восстанавливается гидроксид меди до оксида меди).

Ход работы

К 1 мл мочи добавляют 1 мл  реактива Фелинга и смесь слегка нагревают в пламени горелки до закипания. При наличии глюкозы наблюдается изменение цвета раствора на кирпично-красный. Для сравнения проводят реакцию с мочой здорового человека.

б) Унифицированный метод с помощью индикаторных полосок «Глюкотест».

Принцип метода: Метод основан на специфическом окислении глюкозы ферментом глюкозоксидазой до глюконовой кислоты и перекиси водорода в присутствии кислорода. Наличие в индикаторной зоне полоски пероксидазы способствует окислению аурамина, который при этом изменяет свой цвет от желтого до синего в зависимости от содержания глюкозы. Этот метод позволяет определить концентрацию глюкозы в моче от 0,03% и выше.

Техника работы.

Полоску «глюкотеста» опускают в свежесобранную мочу индикаторным концом, вынимают и на 2 минуты оставляют на воздухе. Затем сравнивают цвет индикаторной зоны со стандартной цветной шкалой «Глюкотеста» и определяют количество глюкозы. При отсутствии глюкозы цвет не изменится.

 

в) Количественное определение глюкозы в моче методом Альтгаузена.

Принцип метода: Метод основан на том, что моча, содержащая глюкозу, при кипячении со щелочью приобретает различные оттенки цветов – от желтого до тёмно-бурого – в зависимости от содержания глюкозы. Продуктами реакции являются молочная кислота и гуминовые вещества.

Техника работы.

 3-4 мл мочи смешивают в пробирке с 1 мл 10% NaOH, кипятят в течение 1 минуты и оставляют на 10 минут в штативе. Сравнивают визуально полученный цвет в пробирке со стандартной шкалой Альтгаузена. Можно провести колориметрию исследуемого  раствора с одним из растворов стандартной шкалы. Результат будет более точным.

Обосновать полученные результаты, исходя из того, что у здоровых людей глюкоза в моче этими методами на определяется.

 

Работа 9. Качественное и количественное определение кетоновых тел в моче.

а) Качественные  реакции на кетоновые тела.

Реакция Легаля.

Принцип метода: Ацетон и ацетоуксусная кислота образуют в щелочной среде с нитропруссидом натрия продукты, окрашенные в красный цвет. При добавлении концентрированной уксусной кислоты образуется комплексная соль вишнёвого цвета.

Техника работы.

Берут 2 пробирки, в одну вносят 0,5 мл мочи здорового человека, во вторую – 0,5 мл патологической мочи (больного сахарным диабетом). В обе пробирки добавляют по 0,5 мл 10% NaOH и  по 5 капель нитропруссида натрия. Наблюдают окрашивание в пробирках. Добавляют в обе пробирки по 5-6 капель концентрированной уксусной кислоты. Отмечают изменение цвета в пробирках. При сравнении их делают вывод о наличии или отсутствии в моче ацетона.

Реакция Герхарда.

Принцип метода: При добавлении к моче раствора FeCl3 выпадает в осадок фосфат железа  (FeРО4). При наличии ацетоуксусной кислоты после добавления избытка FeCl3 появляется вишнёво-красное окрашивание (при лёгком нагревании реакция проходит активнее).

Техника работы.

Берут 2 пробирки. В первую вносят 2 мл мочи здорового человека, во вторую – 2 мл мочи больного сахарным диабетом. В каждую пробирку добавляют по каплям 10% FeCl3. Образовавшийся осадок фосфатов отфильтровывают с помощью бумажного фильтра. К фильтрату добавляют еще несколько капель FeCl3, наблюдают появление окрашивания. При сравнении цвета в обеих пробирках делают вывод о наличии или отсутствии ацетоуксусной кислоты в моче.

 

б)  Количественное определение кетоновых тел в моче.

Принцип метода: Ацетон в присутствии нитропруссида натрия и уксусной кислоты при наслаивании аммиака образует фиолетовое кольцо, скорость появления которого зависит от концентрации ацетона. Установлено, что появления кольца между 3-4 мин соответствует содержанию ацетона 8,5 мг /1 л мочи.

Техника работы.

Берут 5 пробирок, в каждую вливают по 1 мл Н2О. В первую добавляют мочу, содержащую ацетон (!), перемешивают, получают разведение мочи в 2 раза. Отбирают 1 мл этой мочи из первой пробирки и переносят во вторую, перемешивают, получая разведение в 4 раза. Из этой пробирки 1 мл мочи переносят в третью (разведение в 8 раз) и так до последней. Из последней пробирки 1 мл смеси выливают (во всех пробирках остаётся по 1 мл смеси). Затем во все пробирки добавляют по 8 капель 50% (NH4)2SO4, по 8 капель нитропруссида натрия и по 8 капель концентрированной уксусной кислоты. Содержимое пробирок перемешивают и в каждую по стенкам наcлаивают по 0,5 мл концентрированного аммиака, начиная из последней пробирки. К концу 4 мин отмечают последнюю пробирку, где еще заметно фиолетовое кольцо.

Расчёт ведут по формуле:

Х = 8,5 ×а × 1,5

Х – концентрация ацетона в моче (мг/сутки);

8,5 – эмпирическое число;

а – разведение мочи;

1,5 – пересчёт на суточное количество мочи (1,5 л).

По результатам делают вывод о количестве ацетона в исследуемой моче, исходя из того, что у здоровых людей оно не превышает 40 мг в сутки.

 

Программа самоподготовки студентов к занятию

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух. Биотрансформация ксенобиотиков.

1.     Функции печени.

2.     Роль печени в обмене углеводов, липидов и белков.

3.     Участие печени в регуляции витаминного и водно-минерального обмена.

4.     Желчеобразующая и экскреторная роль печени.

5.     Катаболизм Нв, образование жёлчных пигментов.

6.     Понятие о “прямом” и “непрямом” билирубине, истинном уробилине.

7.     Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.

8.     Клиническое значение анализа билирубина в сыворотке крови и метод его определения.

 

9.     Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

10.                       Типы реакций биотрансформации инородных и эндогенных химических  соединений  в  печени. 

11.                       Реакции  микросомального  окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ. 

12.                       Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное значение.

13.                       Клиническое значение исследования функционального состояния печени с помощью тимоловой пробы и качественной реакции на индикан.

II Мочеобразовательная функция почек. Физико-химические свойства и химический состав нормальной мочи. Патобиохимия почек. Патологические компоненты мочи.

1. Функции почек в организме:

а) выделение конечных продуктов обмена;

б) регуляция кислотно-щелочного равновесия;

в) регуляция водно-солевого обмена, кровяного давления;

г) эндокринная функция.

2. Особенности биохимических процессов в почках.

3. Механизм образования мочи (фильтрация, реабсорбция, секреция).

4. Представление о клиренсе.

5. Регуляция образования мочи.

6. Физико-химические свойства и составные части мочи:

а) суточный объем и физико-химические свойства мочи;

б) минеральные компоненты мочи;

в) органические компоненты мочи.

7. Методы исследования физико-химических свойств, определение общего азота мочи, диагностическое значение.

8. Патологические компоненты мочи, которые вызваны определенными нарушениями обмена веществ в организме:

а) глюкозурия;

б) кетонурия;

в) билирубинурия;

г) уробилинурия;

д) креатинурия;

ж) индиканурия;

з)фенилкетонурия.

9. Причины изменения содержания в моче нормальных компонентов:

а) мочевины

б) креатинина;

в) аминокислот;

г) мочевой кислоты;

д) ферментов;

ж) неорганических веществ;

з) общего азота.

3. Показатели, которые свидетельствуют о нарушении функции почек:

а) протеинурия;

б) гематурия;

в) глюкозурия;

г) пиурия;

д) креатинурия.

10. Методы определения в моче белка, глюкозы, кетоновых тел, крови. Диагностическое значение.

 

Семинарское обсуждение теоретических вопросов и практической работы:

- 12.30-14.00 час. при 6-часовом занятии

 

Образцы тестовых заданий и ситуационных задач (привести 5-6 примеров).

1. Показатель тимоловой пробы исследуемой сыворотки крови составляет    20 ЕД. Дайте оценку полученному результату.

2. Реакция на индикан в моче положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?

3. В моче человека обнаружен билирубинглюкурониды и мезобилирубиноген (уробилиноген). В сыворотке крови содержание общего билирубина составляет 40 мкмоль/л, прямого билирубина 25 мкмоль/л, непрямого-15 мкмоль/л, кал гипохолический. О чем свидетельствуют данные показатели?

4. У больного желтухой общий билирубин составляет 54 мкмоль/л, прямой билирубин-29 мкмоль/л, непрямой-25 мкмоль/л. Кал  ахолический. В моче положительная реакция на билирубин. Какое заболевание можно предположить?

5. У пациента за сутки выделяется более 2 л мочи. Как оценить такой результат? Возможные причины такого состояния.

6. У больного выделяется моча с удельным весом 1,035. Отвечает ли это норме? Какие причины такого состояния?

7. За сутки больной выделяет 30 г общего азота с мочой. Какие процессы в организме могли привести к этому?

8. При исследовании порций мочи, собранных в отдельные посудины на протяжении суток, оказалось, что удельный вес мочи колеблется в пределах 1,008-1,012. Как трактовать такое состояние? Когда это может наблюдаться?

9. У больного суточный диурез составляет 3,5 литра. В моче обнаружены глюкоза и кетоновые тела. Какие причины и возможные последствия такого состояния?

10. У больного обнаружено увеличение содержания мочевины и креатинина в крови и уменьшение их в моче. Какие возможные причины и следствия такого состояния?

 

Исходный уровень знаний и умений проверяется путем решения ситуационных задач по каждой теме, ответами на тесты типа "Крок", конструктивные вопросы и тому подобное (1415 - 1500 час.).

 

Студент должен знать:

1.     Распад гемоглобина в тканях.

2.     Механизм детоксикации билирубина.

3.     Понятие о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.

4.     Виды желтух, их биохимическая характеристика.

5.     Значение анализа билирубина для клинической практики.

6.     Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

7.     Функции почек, механизм и регуляция образования мочи.

8.     Роль почек в регуляции гомеостаза.

9.     Физико-химические свойства и химический состав мочи здорового человека и их изменения при заболеваниях почек и нарушениях процесса обмена в организме.

 

Студент должен уметь:

1.     Определять содержание общего билирубина в сыворотке крови, объяснять значение данного анализа в диагностике желтух.

2.     Определить наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию печени.

3.     Провести тимоловую пробу с сывороткой крови, обьяснить её значение в диагностике белоксинтезирующей функции печени.

4.      Исследовать физико-химические свойства мочи.

5.      Определить содержание общего азота мочи.

6.      Определить наличие и количество глюкозы, белка, ацетона, наличие крови в моче.

7.      Обосновать значение этих анализов в клинической практике.

 

Эталоны ответов на тесты и ситуационные задачи:

1. Имеет место повышение показателя, что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной желтухе.

2. Обезвреживающая функция печени не нарушена.

3. У больного паренхиматозная желтуха.

4. Механическая желтуха.

5. Наблюдается полиурия. Возможные причины: употребление мочегонных средств, сахарный диабет, несахарный диабет, некоторые нервные заболевания, болезни почек, употребление большого количества жидкости.

6. Удельный вес мочи повышен (гиперстенурия). Это возможно при потере воды организмом (длительное пребывание в горячем климате, рвота, диарея, высокая температура тела), при некоторых заболеваниях почек, сахарном диабете.

7. Увеличение содержания общего азота в моче может свидетельствовать о повышенном употреблении белковых продуктов или усиленном распаде белков в организме (лихорадочные состояния, злокачественные опухоли, туберкулезный процесс, рассасывание эксудатов и транссудатов).

8. Имеет место изостенурия, что может быть при тяжелой почечной недостаточности, когда почки теряют концентрационную способность и выделяют мочу с плотностью, которая не отличается от плотности первичной мочи.

9. Сочетание полиурии, глюкозурии и кетонурии возможно при  недостаточности инсулина (сахарном диабете), при этом нарушается углеводный, белковый, липидный и водно-минеральный обмены, может  возникнуть кетоз.

10. Заболевание, которое приводит к почечной недостаточности. Следствие - интоксикация организма (уремия).

 

Источники информации:

Основные:

  1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.
  2. Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.
  3. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.
  4. Конспекты лекций.
  5. Веб-страница университета > Материалы для подготовки к практическим занятиям.
  6. Веб-страница университета > Презентации лекций.

Дополнительные:

1.     Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2.     Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

  

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня  2013 г. протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа   2013 г. протокол №  2