Методические указания
к практическим занятиям для студентов медицинского
факультета
ЗАНЯТИЕ № 17 (практическое - 6 часов)
Тема 1:
Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина:
обмен желчных пигментов, биохимия желтух.
Тема 2:. Биотрансформация ксенобиотиков и
эндогенных токсинов в печени: микросомальное
окисление, цитохром Р-450.
Цель: Уметь
определять содержание билирубина в сыворотке крови и применять знание об обмене
хромопротеинов для объяснения механизма возникновения желтух Уметь выполнять тимолову пробу и
качественную реакцию на индикан и использовать полученные результаты для оценки функционального состояния печени.
Профессиональная ориентация студентов:
Печень является главным органом обезвреживания токсических веществ, в частности
продуктов гниения белков (индола, скатола и др.), потому определение содержания
индикана в моче является важным признаком
детоксикационной функции печени и усиления
гнилостных процессов в кишечнике. Билирубин относится к желчным пигментам,
является токсичным веществом, обезвреживается в клетках печени. Нагромождение
билирубина в крови выше 35 мкмоль/л приводит к откладыванию его в тканях, появлению желтухи.
Потому определение содержания билирубина в сыворотке крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики желтух.
Методика выполнения практической
работы: - 9.00-12.00 час.
I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух.
Работа 1. Провести определение общего
билирубина в сыворотке крови.
ІІ Биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов в печени: микросомальное окисление, цитохром Р-450.
Работа 2. Провести качественную реакцию на индикан в моче.
Работа 3. Провести тимоловую пробу.
Техника
выполнения лабораторных работ прилагается
Работа № 1. Определение общего билирубина в сыворотке крови.
Принцип метода. Билирубин образует с диазореактивом
соединение (азобилирубин) розового цвета.
Интенсивность цвета пропорциональна концентрации билирубина и определяется колориметрически. Свободный (непрямой) билирубин
нерастворимый, поэтому его предварительно переводят в растворимое состояние
добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива.
Ход работы
К 0,5 мл сыворотки крови
добавляют 0, 25 мл смеси диазореактива ( 10 мл диазореактива № 1
смешивают с 0, 3 мл диазореактива № 2) и 1, 75 мл
кофеинового реактива. Перемешивают и оставляют пробирку на 10 мин., после чего колориметрируют на ФЭКе при
зелёном светофильтре в кювете
Расчёт по формуле:
Сст´Эоп
Х= -------------, где:
Эоп
Х – концентрация
билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);
Эоп и Эст – экстинкции
опытной и стандартной проб.
Оценить полученный
результат, исходя из того, что в норме концентрация общего билирубина в крови
составляет 1, 7 – 20, 5 мкмоль/л. Увеличение в крови
билирубина выше 35 мкмоль/л приводит к отложению его
в тканях, появление желтухи. Однако для диагностики и дифференциации желтух необходимо определение соотношения свободного
(непрямого) и связанного (прямого) билирубина. В норме их содержание
соответственно составляет 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л и 0,
86 – 4, 3 мкмоль/л.
Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).
Принцип метода. При действии концентрированной НСl индикан гидролизует
с образованием индола, который окисляется с помощью FeCl3 в индоксил и синее индиго.
Ход работы
К 4 мл мочи добавляют 0,
4 мл раствора ацетата свинца (CH3COOPb) для осаждения жёлчных пигментов,
солей и др. веществ. Фильтруют, затем 1 -2 мл фильтрата смешивают с равным
объёмом реактива Обермейера (раствор FeCl3
в концентрированной НСl), добавляют 0, 5 – 1 мл хлороформа и осторожно перемешивают.
Наблюдают несколько минут. Если нижний хлороформный слой окрашивается в синий
или красноватый цвет, реакция считается положительной. В норме реакция
отрицательная.
Положительная реакция
свидетельствует об усилении процессов гниения белков в организме, но
обезвреживающая функция печени не нарушена.
Работа 3. Провести тимоловую пробу.
Принцип метода. Проба основана на определении степени помутнения смеси
сыворотки крови с насыщенным раствором тимола в вероналовом
буфере, что обусловлено его взаимодействием с крупнодисперсными белками
сыворотки – гамма-глобулинами и липопротеинами
низкой плотности. Проба становится положительной при уменьшении содержания
альбумина и увеличением бета- и гамма-глобулинов.
Ход работы
В пробирку вносят 4, 8 мл
тимолового реактива, добавляют 0,08 мл сыворотки крови, перемешивают,
выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Фотометрируют
против тимолового реактива при длине волны 630-690 нм. Степень помутнения
находят по калибровочному графику. Калибровочный график приготовлен в
лаборатории кафедры. В норме тимоловая проба соответствует 0 – 5 ед.
помутнения.
Повышение показателей (положительная проба, больше 5
ед.) отмечается при гепатитах, эндокардите. При механической желтухе, ревматизме
проба отрицательная.
Программа самоподготовки студентов к
занятию
I Биохимические
функции печени. Метаболизм порфирина:
обмен желчных пигментов, биохимия желтух.
1. Функции печени.
2. Роль печени в обмене углеводов,
липидов и белков.
3. Участие печени в регуляции
витаминного и водно-минерального обмена.
4. Желчеобразующая и экскреторная роль
печени.
5. Катаболизм Нв,
образование жёлчных пигментов.
6. Понятие о “прямом” и “непрямом”
билирубине, истинном уробилине.
7. Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.
8. Клиническое значение анализа
билирубина в сыворотке крови и метод его определения.
II Биотрансформация ксенобиотиков и
эндогенных токсинов в печени: микросомальное окисление, цитохром
Р-450.
1. Обезвреживание токсических веществ в
печени; биотрансформация ксенобиотиков
и эндогенных токсинов.
2. Типы реакций биотрансформации
инородных и эндогенных химических
соединений в печени.
3. Реакции микросомального окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ.
4. Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное
значение.
5. Клиническое значение исследования
функционального состояния печени с помощью тимоловой пробы и качественной
реакции на индикан.
Семинарское обсуждение теоретических вопросов: - 12.0-14.00 час.
Тестовые задания и ситуационные задачи.
(привести
5-6 примеров).
1. Показатель тимоловой пробы
исследуемой сыворотки крови составляет 20 ЕД. Дайте оценку полученному
результату.
2. Реакция на индикан в моче
положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?
3. В моче человека обнаружен билирубинглюкурониды и мезобилирубиноген
(уробилиноген). В сыворотке крови содержание общего
билирубина составляет 40 мкмоль/л, прямого билирубина
25 мкмоль/л, непрямого-15 мкмоль/л,
кал гипохолический. О чем свидетельствуют данные
показатели?
4. У больного желтухой общий билирубин
составляет 54 мкмоль/л, прямой билирубин-29 мкмоль/л, непрямой-25 мкмоль/л.
Кал ахолический.
В моче положительная реакция на билирубин. Какое заболевание можно
предположить?
Самостоятельная работа
студентов. 1415-1500
Студент должен знать:
1.
Распад
гемоглобина в тканях.
2.
Механизм
детоксикации билирубина.
3.
Понятие
о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.
4.
Виды
желтух, их биохимическая характеристика.
5.
Значение
анализа билирубина для клинической практики.
6.
Обезвреживание
токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.
Студент
должен уметь:
1.
Определять
содержание общего билирубина в сыворотке крови, объяснять значение данного
анализа в диагностике желтух.
2.
Определить
наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию
печени.
3. Провести тимоловую пробу с сывороткой крови, обьяснить её значение в диагностике белоксинтезирующей
функции печени.
Верные ответы на тесты и ситуационные
задачи:
1. Имеет место повышение показателя,
что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной
желтухе.
2. Обезвреживающая функция печени не
нарушена.
3. У больного паренхиматозная желтуха.
4. Механическая желтуха.
4. Источники
информации:
1.
Березов
Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.:
Медицина, 1990. - 543 с.
2.
Савицкий
И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.
3.
Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по
биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.
4.
Конспекты
лекций.
5.
Веб-страница университета > Интранет > На
помощь студентам > Материалы
для подготовки к практическим занятиям
6.
Веб-страница университета > Интранет > На
помощь студентам > Презентации
лекций
Дополнительные:
2. Ленинджер
А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.
Методические
указания составила ст.преподаватель Шершун Г.Г.
Обсуждено
и утверждено на заседании кафедры
«11»
июня
Пересмотрено
и утверждено на заседании кафедры
«29» августа