ЗАНЯТИЕ № 18 (практическое - 6 часов)

Методические указания

к практическим занятиям для студентов медицинского факультета

ЗАНЯТИЕ № 17 (практическое - 6 часов)

 

Тема 1: Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух.

Тема 2:. Биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов в печени: микросомальное окисление, цитохром Р-450.

 

Цель: Уметь определять содержание билирубина в сыворотке крови и применять знание об обмене хромопротеинов для объяснения механизма возникновения желтух Уметь выполнять тимолову пробу и качественную реакцию на индикан и использовать полученные результаты  для оценки функционального состояния печени.

 

Профессиональная ориентация студентов: Печень является главным органом обезвреживания токсических веществ, в частности продуктов гниения белков (индола, скатола и др.), потому определение содержания индикана в моче является важным признаком  детоксикационной функции печени и усиления гнилостных процессов в кишечнике. Билирубин относится к желчным пигментам, является токсичным веществом, обезвреживается в клетках печени. Нагромождение билирубина в крови выше 35 мкмоль/л приводит к  откладыванию его в тканях, появлению желтухи. Потому определение содержания билирубина в сыворотке крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики желтух.

 

Методика выполнения практической работы: - 9.00-12.00 час.

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух.

 Работа 1. Провести определение общего билирубина в сыворотке крови.

 

ІІ Биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов в печени: микросомальное окисление, цитохром Р-450.

Работа 2. Провести качественную реакцию на индикан в моче.

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Техника выполнения лабораторных работ прилагается

Работа № 1. Определение общего билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин образует с диазореактивом соединение (азобилирубин) розового цвета. Интенсивность цвета пропорциональна концентрации билирубина и определяется колориметрически. Свободный (непрямой) билирубин нерастворимый, поэтому его предварительно переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива.

Ход работы

К 0,5 мл сыворотки крови добавляют 0, 25 мл смеси диазореактива ( 10 мл диазореактива № 1 смешивают с 0, 3 мл диазореактива № 2) и 1, 75 мл кофеинового реактива. Перемешивают и оставляют пробирку на 10 мин., после чего колориметрируют на ФЭКе при зелёном светофильтре в кювете 5 мм против воды. Стандартный раствор билирубина (10 мкмоль/л) колориметрируют при этих же условиях. Он приготовлен в лаборатории кафедры.

Расчёт по формуле:

Сст´Эоп

Х= -------------, где:

Эоп

 

Х – концентрация билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л);

Эоп и Эст – экстинкции опытной и стандартной проб.

 

Оценить полученный результат, исходя из того, что в норме концентрация общего билирубина в крови составляет 1, 7 – 20, 5 мкмоль/л. Увеличение в крови билирубина выше 35 мкмоль/л приводит к отложению его в тканях, появление желтухи. Однако для диагностики и дифференциации желтух необходимо определение соотношения свободного (непрямого) и связанного (прямого) билирубина. В норме их содержание соответственно составляет 1, 7 – 17, 1 мкмоль/л и 0, 86 – 4, 3 мкмоль/л.

 

Работа 2. Качественная реакция на индикан в моче (реакция Обермейера).

Принцип метода. При действии концентрированной НСl индикан гидролизует с образованием индола, который окисляется с помощью FeCl3 в индоксил и синее индиго.

Ход работы

К 4 мл мочи добавляют 0, 4 мл раствора ацетата свинца (CH3COOPb) для осаждения жёлчных пигментов, солей и др. веществ. Фильтруют, затем 1 -2 мл фильтрата смешивают с равным объёмом реактива Обермейера (раствор FeCl3 в концентрированной НСl), добавляют 0, 5 – 1 мл хлороформа и осторожно перемешивают. Наблюдают несколько минут. Если нижний хлороформный слой окрашивается в синий или красноватый цвет, реакция считается положительной. В норме реакция отрицательная.

Положительная реакция свидетельствует об усилении процессов гниения белков в организме, но обезвреживающая функция печени не нарушена.

 

Работа 3. Провести тимоловую пробу.

Принцип метода. Проба основана на определении степени помутнения смеси сыворотки крови с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере, что обусловлено его взаимодействием с крупнодисперсными белками сыворотки – гамма-глобулинами и липопротеинами низкой плотности. Проба становится положительной при уменьшении содержания альбумина и увеличением бета- и гамма-глобулинов.

Ход работы

В пробирку вносят 4, 8 мл тимолового реактива, добавляют 0,08 мл сыворотки крови, перемешивают, выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Фотометрируют против тимолового реактива при длине волны 630-690 нм. Степень помутнения находят по калибровочному графику. Калибровочный график приготовлен в лаборатории кафедры. В норме тимоловая проба соответствует 0 – 5 ед. помутнения.

Повышение показателей (положительная проба, больше 5 ед.) отмечается при гепатитах, эндокардите. При механической желтухе, ревматизме проба отрицательная.

 

Программа самоподготовки студентов к занятию

I Биохимические функции печени. Метаболизм порфирина: обмен желчных пигментов, биохимия желтух.

1. Функции печени.

2. Роль печени в обмене углеводов, липидов и белков.

3. Участие печени в регуляции витаминного и водно-минерального обмена.

4. Желчеобразующая и экскреторная роль печени.

5. Катаболизм Нв, образование жёлчных пигментов.

6. Понятие о “прямом” и “непрямом” билирубине, истинном уробилине.

7. Механизм возникновения желтух, их биохимическая характеристика.

8. Клиническое значение анализа билирубина в сыворотке крови и метод его определения.

 

II Биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов  в печени: микросомальное окисление, цитохром Р-450.

1. Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

2. Типы реакций биотрансформации инородных и эндогенных химических  соединений  в  печени. 

3. Реакции  микросомального  окисления; индукторы и ингибиторы микросомальных монооксигеназ. 

4. Реакции конъюгации в гепатоците: биохимические механизмы, функциональное значение.

5. Клиническое значение исследования функционального состояния печени с помощью тимоловой пробы и качественной реакции на индикан.

 

Семинарское обсуждение теоретических вопросов: - 12.0-14.00 час.

 

Тестовые задания и ситуационные задачи. (привести 5-6 примеров).

1. Показатель тимоловой пробы исследуемой сыворотки крови составляет 20 ЕД. Дайте оценку полученному результату.

2. Реакция на индикан в моче положительная. Какую оценку функции печени можно дать в данном случае?

3. В моче человека обнаружен билирубинглюкурониды и мезобилирубиноген (уробилиноген). В сыворотке крови содержание общего билирубина составляет 40 мкмоль/л, прямого билирубина 25 мкмоль/л, непрямого-15 мкмоль/л, кал гипохолический. О чем свидетельствуют данные показатели?

4. У больного желтухой общий билирубин составляет 54 мкмоль/л, прямой билирубин-29 мкмоль/л, непрямой-25 мкмоль/л. Кал  ахолический. В моче положительная реакция на билирубин. Какое заболевание можно предположить?

 

Самостоятельная работа студентов. 1415-1500

Письменное тестирование студентов, которые не сдали контроль за системой «MOODLE», просмотр тематических учебных таблиц, тренинг в копьютерном классе тестов лицензионному экзамену "Крок-1» и кафедральной базы тестов, углубленное изучение материала тем, вынесенных на самостоятельную проработку т.п.

 

Студент должен знать:

1.           Распад гемоглобина в тканях.

2.           Механизм детоксикации билирубина.

3.           Понятие о "прямом" и "непрямом" билирубине, их содержании в крови.

4.           Виды желтух, их биохимическая характеристика.

5.           Значение анализа билирубина для клинической практики.

6.           Обезвреживание токсических веществ в печени; биотрансформация ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

 

Студент должен уметь:

1.           Определять содержание общего билирубина в сыворотке крови, объяснять значение данного анализа в диагностике желтух.

2.           Определить наличие индикана в моче, по результатам анализа оценить обезвреживающую функцию печени.

3. Провести тимоловую пробу с сывороткой крови, обьяснить её значение в диагностике белоксинтезирующей функции печени.

 

Верные ответы на тесты и ситуационные задачи:

1. Имеет место повышение показателя, что наблюдается при вирусном гепатите, паренхимаозной желтухе.

2. Обезвреживающая функция печени не нарушена.

3. У больного паренхиматозная желтуха.

4. Механическая желтуха.

 

4. Источники информации:

Основные:

1.                Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.

2.                Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.

3.                Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.

4.                Конспекты лекций.

5.                Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Материалы для подготовки к практическим занятиям

6.                Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Презентации лекций

Дополнительные:

1. Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

 

Методические указания составила ст.преподаватель Шершун Г.Г.

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня 2013 г. Протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа 2013 г. Протокол № 2