Медицина

ЗАНЯТИЕ № 9 (практическое - 6 часов)

 

Методические указания

к практическим занятиям для студентов медицинского факультета.

ЗАНЯТИЕ № 8 (практическое - 6 часов)

 

Тема 1: Катаболизм простых белков. Пищеварение, химический состав пищеварительных секретов, усвоение.

Тема 2: Общие пути превращения аминокислот.

 

Цель: Уметь определять кислотность, патологические компоненты желудочного сока, анализировать диагностическое значение этих показателей. Анализировать биохимические закономерности общих путей внутриклеточного обмена аминокислот, обьяснить функции биогенных аминов.

 

Профессиональная ориентация студентов:

Желудочный сок - это секрет желез слизистой оболочки желудка, роль которого в основном заключается в пищеварении белков. Определение кислотности желудочного сока, наличия патологических компонентов (крови, желчи, молочной кислоты) является одним из способов диагностики заболеваний желудка и 12-перстной кишки. Определение аминотрансфераз в крови широко используется в диагностике заболеваний печени, сердца.

 

Методика выполнения практической работы.- 9.00-12.00 час.

I Катаболизм простых белков. Пищеварение, химический состав пищеварительных секретов, усвоение.

Работа 1. Определение всех видов кислотности в образцах желудочного сока

Работа 2. Качественные реакции на патологические компоненты желудочного сока (кровь, молочная кислота, желчь).

ІІ Общие пути превращения аминокислот.

Работа 1. Определение активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови. Техника выполнения лабораторных работ прилагается

Работа 2. Определение всех видов кислотности желудочного сока в одной порции.

 

Принцип метода: Общая кислотность – это сумма всех кислореагирующих веществ желудочного сока (HCl, кислые фосфаты, органические кислоты, связанная с белками HCl). Для определения используется фенолфталеин, который при нейтрализации кислых веществ приобретает слабо-розовый цвет (интервал перехода окраски –  рН 8,3-10. При рН < 8,3 он бесцветный).

Свободная HCl (диссоциированная) нейтрализуется при рН 2,9-3,0 и определяется в присутствии индикатора п-диметиламиноазобензола  (интервал перехода рН 2,9-4,0). В присутствии HCl (рН<2,9) он имеет розово-красный цвет, при рН>2,9 меняет на оранжевый.

Кислотность желудочного сока выражают количеством 0,1 н NaOH, которое используется для нейтрализации кислых продуктов в 1000 мл желудочного сока и выражается в ммоль/л.

Техника работы.

В колбочку отмеривают 5 мл желудочного сока, добавляют по 1 капле фенолфталеина и п-диметиламиноазобензола. При наличии свободной HCl жидкость окрашивается в розово-красный цвет. Титруют раствор 0,1 н NaOH (по каплям, перемешивая) до появления оранжевого цвета, записывают результат, он используется для определения свободной HCl. Не доливая NaOH в бюретку, продолжают титрование до появления лимонно-желтого цвета, записывают результат (он используется для определения общей HCl – суммы свободной и связанной HCl). Продолжают титрование до появления розового цвета, записывают результат, который используется для расчёта общей кислотности.

ПРИМЕР РАСЧЁТА:

Результаты титрования оказались следующими:

Ι показатель – 1,4 мл NaOH;

ΙΙ показатель – 1,6 мл NaOH;

ΙΙΙ показатель – 2,4 мл NaOH.

1000 × 0,1

 

 

 


Свободная HCl равна  1,4 ×                          = 1,4 × 20  (так выглядит формула после сокращения) = 28 ммоль/л.

                                                        5

Среднее арифметическое между ΙΙ и ΙΙΙ показателем соответствует общей HCl.

1,6 + 2,4

 

 

 


                  × 20 = 40 ммоль/л.

2

 

 

 


Связанная HCl равна 40 – 28 = 12 ммоль/л.

Общая кислотность равна 2,4 × 20 = 48 ммоль/л.

Определить таким способом все виды  кислотности в нескольких образцах желудочных соков, оценить полученные результаты, исходя из того, что в норме общая кислотность равна 40-60 ммоль/л, свободная HCl 20-40 ммоль/л, связанная HCl 10-20 ммоль/л.

 

Работа 2. Определение наличия патологических компонентов в желудочном соке.

а) Выявление молочной кислоты.

Следует учитывать, что молочную кислоту можно определить в  желудочном соке с низким содержанием или отсутствием HCl.

Реакция Уффельмана.

Принцип реакции: Молочная кислота при взаимодействии с фенолятом железа образует лактат железа желтого цвета (свободная HCl разрушает этот комплекс).

Техника работы.

Подготовить реактив Уффельмана (10 капель 1% фенола + 1 капля 1% FeCl3), добавить к нему 5 капель желудочного сока. Отметить изменение цвета раствора, оценить результат.

б) выявление крови (используется бензидиновая проба).

Принцип реакции: Пероксидаза крови окисляет в присутствии Н2О2 бензидин, который приобретает синий цвет.

Техника работы.

К 5 каплям 1% бензидина добавляют 5 капель 3% Н2О2 и 5 капель желудочного сока. Отмечают изменение цвета раствора, оценивают результат.

 

Работа 3. Определение активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови.

Принцип метода: Активность этих аминотрансфераз выражается количеством мкмолей ПВК, которая образуется в процессе трансаминирования аланина или аспартата в 1 мл сывортке крови за 1 час инкубации при 37ºC. ПВК определяют с помощью 2,4-динитрофенилгидразина. В норме активность АсАТ равна 0,1-0,45 мкмоль/мл • час(или 8-40 ед.), активность АлАТ равна 0,1-0,68 мкмоль/мл • час или (5-30 ед.).

Техника работы.

Берут три пробирки и вносят реактивы в мл согласно таблицы:

 

Реактивы

Опыт 1 (АсАТ)

Опыт 2 (АлАТ)

Стандарт ПВК

Субстратно-буферный раствор для АсАТ

0,4 мл

Субстратно-буферный раствор для АлАТ

0,4 мл

Помещают на 5 мин опыты в водяную баню при 37ºC

Сывортка крови

0,1 мл

0,1 мл

Помещают обе пробирки на 15 мин в водяную баню при 37ºC

Стандартный раствор ПВК

0,1 мл

2,4-динитрофенилгидразин

0,4 мл

0,4 мл

0,4 мл

Перемешивают, оставляют на 10 мин при комнатной

0,4 н NaОН

4 мл

4 мл

4 мл

Перемешивают, через 5 мин колориметриру4ют (зелёный светофильтр) против воды в кювете 5 мм

 

Расчёт:

ССТ × ЭОП

 

 

 


ЭСТ

 

 
СОП =                               × 10 × 4 (ед.), где:

 

 

ССТ – концентрация стандарта (0,88 мкг/0,1 мл);

ЭСТ – экстинкция стандарта;

ЭОП – экстинкция опыта;

10 – перерасчёт на 1 мл сыворотки;

4 – перерасчёт на 1 час инкубации.

 

Перерасчёт на мкмоль/ мл • час:

 

Программа самоподготовки студентов к занятию

I Катаболизм простых белков. Пищеварение, химический состав пищеварительных секретов, усвоение.

1. Нормы белка в питании. Полноценные и неполноценные белки. Заменимые и незаменимые аминокислоты.Азотистый баланс.

2. Пищеварение белков в желудке и тонком кишечнике:

а) Роль соляной кислоты в пищеварении. Виды кислотности желудочного сока, методы их определения

б) Определение понятий: гиперацидитас, гипоацидитас, анацидитас, ахилия, гиперхлоргидрия, гипохлоргидрия, ахлоргидрия.

в) Патологические составные компоненты желудочного сока, их определение, значение в диагностике.

г) Пищеварение белков в тонком кишечнике, роль ферментов поджелудочной железы

3. Всасывание продуктов расщепления белков. Гниение белков в кишечнике.

 

ІІ Общие пути превращения аминокислот.

1. Общие пути распада аминокислот в тканях до конечных продуктов.

2. Дезаминирование аминокислот, его виды. Роль ферментов и коферментов

3. Трансаминирование аминокислот, механизм, роль ферментов и коферментов.

4. Взаимосвязь трансаминирования и дезаминирования.

5. Декарбоксилирование аминокислот, роль ферментов и коферментов.

6. Биологическая роль образовавшихся продуктов. Окисление биогенных аминов.

 

Семинарское обсуждение теоретических вопросов: - 12.30-14.00 час.

 

Тестовые задания и ситуационные задачи.

1.                                   В желудочном соке обнаружили молочную кислоту, низкая общая кислотность. О чем свидетельствуют эти данные?

2.                                   При исследовании желудочного сока бензидиновая проба оказалась положительной. Соответствует ли это норме? Чем это можно объяснить?

3.                                   В желудке действуют протеолитические ферменты:

А. Трипсин, химотрипсин

В. Пепсин, энтерокиназа

С. Трипсин, ренин

Д. Пепсин, гастриксин, ренин

Е. Аминопептидаза, карбоксипептидаза

4. В результате декарбоксилирования аминокислот в организме образуются:

А. Аммиак, мочевина, креатин

В. Амины, диамины

С. Полипептиды, мочевая кислота

Д. Дипептиды, ксантин

Е. Индол, скатол

5. При декарбоксилировании гистидина образуется:

А. Тирамины

В. Гистамин

С. Путресцин

Д. Кадаверин

Е. Серотонин

 

Самостоятельная работа студентов. 1415-1500

Письменное тестирование студентов, которые не сдали контроль за системой «MOODLE», просмотр тематических учебных таблиц, тренинг в копьютерном классе тестов лицензионному экзамену "Крок-1» и кафедральной базы тестов, углубленное изучение материала тем, вынесенных на самостоятельную проработку т.п.

 

Студент должен знать:

1. Пищеварение белков в желудке и кишечнике. Роль ферментов.

2. Пул свободных аминокислот в крови: источники, пути использования их в тканях.

3. Прямое дезаминирование аминокислот.

4. Непрямое дезаминированиетрансаминирование, механизмы действия аминотрансфераз, биологическое значение процесса.

5. Декарбоксилирование аминокислот, роль биогенных аминов, их окисление.

 

Студент должен уметь:

1. Определять кислотность желудочного сока, наличие патологических компонентов, давать клиническую трактовку результатам.

2. Определять активность трансаминаз в крови, оценивать значение этих показателей в диагностике болезней печени и сердца.

 

Верные  ответы на тесты и ситуационные задачи:

1. Возможен гипоацидный гастрит, рак желудка.

2. Это свидетельствует о наличии крови в желудочном соке, возможна язва желудка.

3. Д

4. В

5. В

 

Источники информации:

Основные:

1.                Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - Г.: Медицина, 1990. - 543 с.

2.                Савицкий И.В. Биологическая химия - К.: Высшая школа, 1982. -470 с.

3.                Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. – М.: Медицина. 1983 с. 97–100.

4.                Конспекты лекций.

5.                Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам > Материалы для подготовки к практическим занятиям

6.                Веб-страница университета > Интранет > На помощь студентам >  Презентации лекций.

 

Дополнительные:

1. Николаев А.Я. Биологическая химия. - М: Высшая школа, 1989. - 496 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии: Перевод с англ. - М.: Мир, 1985. - 1024 с.

 

Методические указания составила ст.преподаватель Шершун Г.Г.

 

Обсуждено и утверждено на заседании кафедры

«11» июня 2013 г. протокол № 13

Пересмотрено и утверждено на заседании кафедры

«29» августа 2013 г. протокол № 2